Atsargumo priemonės poliakrilamido gelio elektroforezei

· poliakrilamidogelis turi sudaryti iš akrilamido monomero, polimerizacijos pradinės medžiagos, katalizatoriaus ir druskos bei buferinio mišinio kartu.

· akrilamidasir BIS (N,N'-metileno dvigubas akrilamidas) yra monomero formos gelio matrica.

· amonio persulfato pradėti klijų polimerizacijos procesą. Norint paruošti klijus, reikia 10% amonio persulfato tirpalo, paruošto vandenyje. Dauguma informacijos rodė aktyvaus naudojimo poreikį. Tačiau 10% tirpalas gali būti laikomas 4 ℃ temperatūroje keletą savaičių be reikšmingo aktyvumo praradimo. Pripilkite iki 10 ml ir išmeskite, kai klijai nesusikaupia.

Patarimas: procentasakrilamidassekvenavimo klijai ir baltyminiai klijai nėra tas pats. Jei naudojate paruoštą akrilamidą: BIS tirpalą, įsitikinkite, kad gavote tinkamą butelį.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametiletilendiaminas) yra katalizatorius, rudame buteliuke, dedamas į šaldytuvą. Pridėti prieš pat pilant klijus.

· poliakrilamido elektroforezė elektroforezei panaudotas stiklas turi būti plaunamas prieš ir po kiekvieną kartą. Po elektroforezės nuplaukite minkštu šepetėliu ir skudurėliu karštame muiluotame vandenyje, nuplaukite distiliuotu vandeniu ir palikite išdžiūti.

· Su tuščiaviduriu polimeru gali atsirasti drėgmė ir dulkės. Prieš elektroforezę nuvalykite stiklo plokštę stiklo valikliu ir nuvalykite minkštu šepetėliu. Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir gerai nusausinkite popierine servetėle. Skalavimas 70% etanoliu prieš nuvalant popieriumi padeda išvalyti ir pagreitina džiūvimą. Iš eilės įpilkite akrilamido mėginių: BIS, vandens, buferinio tirpalo, amonio persulfato, TEMED. Gerai suplakite ir iš karto supilkite.

Prieš polimerizaciją poliakrilamido degazuoti nebūtina. (Anksčiau akrilamidas buvo dedamas į vakuumą, kad būtų pašalinti burbuliukai, nes deguonis slopina polimerizaciją.)

Horizontalūs klijų taško mėginių antgaliai.

· Į apatinę dėžutę įdėkite juodo popieriaus lapą juodame fone, kad padarytumėte pavyzdinę skylę, kad būtų aiškiau matyti.
· klijų bakas užpildytas buferis, tiesiai virš koloido.
· jei kraštas turi šviesą, įjunkite šviesą, tegul šviečia koloidinė šviesa. Įtraukite mėginį į pipetę.
· naudojant automatinį pipetavimo įrenginį.
· 10-200 mu 1 skysčio judėjimo taškas gali būti naudojamas daugumoje mėginio taškų. Labai mažoms mėginių angoms (mažiau nei 10 μ1) patogesnė yra ilga pipetės galvutė, naudojama klijų sekai nustatyti.

· pipete tiesiog panardinus į mėginį, įkvėpus lėtai judantį skystį. Mėginys gali atrodyti lipnus su glicerinu, o greitas siurbimas gali pritraukti oro burbuliukų į pipetės galvutę.

· mėginiai įkvėpus pipetės galvutę švelniai judins skysčio galvutę ant vamzdžio krašto arba šluostymo popierius išsiurbs skysčio galvutę už lašelių ribų. Būkite atsargūs, kad neįsiurbtumėte mėginio.

Įdėkite mėginį į mėginio angą

· pipetavimo įtaisas, leidžiantis išlaikyti nedidelį slėgį, kad mėginiai šiek tiek judėtų perpildymo skysčio galvute.
· pipetės galvutė, įdėta į buferį, šiek tiek aukščiau nei taškinės skylės, palaiko teigiamą slėgį. Pipetės galiuką galima įkišti į mažą skylutę.
· lėtai ir tolygiai išimkite mėginius. Pipetės antgalis dedamas virš taškinės mėginio angos, o mėginys nugrimzta į angą. Leiskite mėginiui nuslūgti, kad užpildytų mėginio angą, o ne stumkite.
· kai tik paskutinis lašas mėginio su skysčio galvute, skystis pajudės į antrąją koją, lėtai pakels skysčio judesį, išeis iš buferio

Kaip atlikti vertikalų klijų mėginių ėmimą?

· tarp dviejų stiklo gabalų suformuotos vertikalios klijavimo taško mėginių skylės. Naudojant labai plonus klijus, pipetės galvutės net negalima įkišti tarp dviejų stiklinių plokščių. Stebėkite gliceriną! Uždėkite pipetės galvutę ant mėginio angos ir mėginys nugrims į angą.
· taškas mėginys prieš, būtinai įdėti vertikalaus taško polipropileno acilo gelio mėginio anga yra nuplaunama švariai. Nuplaukite nepolimerizuotą akrilamidą ir vandenį, kuris gali atsirasti mėginio angos apačioje. Vanduo gali žymiai sumažinti mėginio angą. Naudokite 25 ml arba 50 ml švirkštą ir 18 dydžio adatą. Įpilkite elektroforezės buferio ir atsargiai praplaukite mėginio angą.
· gali būti sunku įžvelgti mėginio angą, bet tuo pat metu visa kita yra lengva. Jei yra perteklinių skylių, mėginio buferį galima išbandyti bromfenolio mėlynuoju tirpalu.