· poliakrilamidasGelis turi atlikti akrilamido monomerą, polimerizacijos pradinę medžiagą, katalizatorių ir druskos bei buferio mišinio teisę kartu.
· akrilamidasir bis (n, n '- metileno dvigubas akrilamidas) yra monomero formos gelio matrica.
· Amonio persulfato pradžios klijų polimerizacijos procesas. Klijams suformuluoti reikia 10% amonio persulfato tirpalo, paruošto vandenyje. Didžioji dalis informacijos parodė, kad reikia aktyvaus naudojimo. Tačiau 10% sprendimo gali būti pateiktas 4 ℃ kelioms savaitėms, nepamirštant reikšmingo aktyvumo. Sudarykite iki 10 ml ir išmeskite, kai klijai nesugeba sujungti.
Patarimas: procentasakrilamidasSeksencijos klijuose ir baltymų klijuose nėra tas pats. Jei naudojate paruoštą akrilamidą: BIS tirpalą, būtinai įsigykite tinkamą buteliuką.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametilenendiaminas) yra katalizatorius, rudame buteliuke, įdedame į šaldytuvą. Įpilkite prieš pat pilant klijus.
· Poliakrilamido elektroforezė, naudojamas stiklas elektroforezėje, turėtų būti plaunamas prieš ir po kiekvieno laiko. Po elektroforezės nuplaukite minkštu šepetėliu ir audiniu karštu muiluotu vandeniu, nuplaukite distiliuotu vandeniu ir atsistokite.
· Drėgmė ir dulkės gali sukelti tuščiaviduriu polimeru. Prieš elektroforezę išvalykite stiklo plokštelę stiklo valikliu ir nuvalykite minkštu šepetėliu. Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir kruopščiai išdžiovinkite popieriaus nuvalymu. Skalavimas su 70% etanoliu prieš valant popieriumi, padeda valyti ir pagreitinti džiovinimą. Įpilkite akrilamido pavyzdžių iš eilės: bis, vanduo, buferio tirpalas, amonio persulfatas, temred. Gerai purtykite ir nedelsdami užpilkite.
Prieš polimerizaciją nereikia deginti poliakrilamido. (Akrilamidas buvo dedamas į vakuumą, kad pašalintų burbuliukus, nes deguonis slopina polimerizaciją.)
Horizontalūs klijų taško pavyzdžių patarimai.
· Įdėkite juodo popieriaus lapą į apatinę dėžę, juodą foną, kad padarytumėte šiek tiek mėginio skylės, kad galėtumėte aiškiau pamatyti.
· Klijų bako užpildytas buferis, šiek tiek virš koloido.
· Jei kraštas turi šviesą, įjunkite žibintus, leiskite apšviesti koloidą. Nubrėžkite mėginį į pipetę.
· Automatinio pipetavimo įrenginio naudojimas.
· 10-200 MU 1 skysčio judėjimo taškas gali būti naudojamas daugelyje mėginio taškų. Labai mažoms mėginių skylutėms (mažiau nei 10μ1) ilga pipetės galvutė, naudojama klijams sekos nustatymui, yra patogesnė.
· Pipetuojama tik panardinta į mėginį, įkvėpus lėtai judančio skysčio. Mėginys gali pasirodyti lipnus su glicerinu, o greitas siurbimas gali įtraukti oro burbuliukus į pipetės galvutę.
· Mėginiai įkvėpus pipetės galvos, skystos galvutės judės ant vamzdžio krašto arba nušluostydamas popierių čiulpia skystą galvą už lašelių. Būkite atsargūs ir nesiurbite mėginio.
Įdėkite mėginį į mėginio skylę
· Pipetavimo įtaisas Norėdami išlaikyti nedidelį slėgį, kad mėginiai šiek tiek judėtų perpildytą skysčio galvutę.
· Į buferį įdėta vamzdynų galva, šiek tiek aukštesnė už taškines skylutes, palaiko teigiamą slėgį. Pipetės galiuką galima įkišti į mažą skylę.
· Lėtai ir stabiliai mėginiai išeina. Pipetės antgalis dedamas virš taškinės mėginio skylės, o mėginys pasineria į skylę. Leiskite mėginiui kristi, kad užpildytumėte mėginio skylę, užuot įsukę.
· Kai paskutinis mėginio lašas su skysta galvu
Kaip atlikti vertikalius klijų mėginių ėmimą?
· Vertikalūs klijų taško mėginio skylės, suformuotos tarp dviejų stiklo gabalų. Labai plonais klijais pipetės galvutės net negali būti įdėta tarp dviejų stiklinių plokštelių. Stebėkite gliceriną! Įdėkite pipetės galvutę virš mėginio skylės, o mėginys nuskendo į skylę.
· Taško mėginys anksčiau būtinai įdėkite polipropileno acilo gelio mėginio skylės vertikalų tašką. Nuplaukite nepolimerizuotą akrilamidą ir vandenį, kuris gali atsirasti mėginio skylės apačioje. Vanduo mėginio skylė gali būti žymiai mažesnė. Naudokite 25 ml arba 50 ml švirkštą ir 18 dydžių adatą. Supilkite elektroforezės buferį ir atsargiai praplaukite mėginio skylę.
· Gali būti sunku pamatyti mėginio skylę, tačiau likusi dalis yra lengva. Jei yra perteklinių skylių, mėginio buferį galima išbandyti bromofenolio mėlyna spalva.
Pašto laikas: MAR-31-2023